Mentype® Chimera®, kök hücre ve kemik iliği transplantasyonunun ardından kimerizm takibi gerçekleştirmek için geliştirilmiş, multiplex bir PCR uygulamasıdır. Test, 200’ün üzerinde HLA-eşleşmeli donör ve alıcı çift arasında kimerizm analizi yapılarak doğrulanmış ve uygunluğu karşılaştırmalı bir klinik değerlendirme çalışmasında onaylanmıştır. Uzun süredir rutin tanılarda başarı ile kullanılmaktadır.
Mentype® Chimera® tarafından belirlenen genetik markörler, 12 kromozom üzerinde yer almaktadır ve çok yüksek bir heterozigotluk oranı ve dengeli bir allel dağılımı ile oldukça polimorfik olan kısa tandem tekrarlarını (STR’ler) temsil ederler.Bu durum, donör-alıcı ayrımı için bilgilendirici lokusları belirleme şansını önemli ölçüde artırır ve kimerizm analizlerinin güvenilirliğini sağlar.
Bir PCR reaksiyonu eşzamanlı olarak D2S1360, D3S1744, D4S2366, D5S2500, D6S474, D7S1517, D8S1132, D10S2325, D12S391, D18S51, D21S2055, SE33 (ACTBP2) otozomal lokusları ve cinsiyete özgü lokus Amelogenin’in eşzamanlı amplifikasyonunu sağlar. Her bir lokus için bir primerin 6-FAM, BTG ya da BTY ile floresan etiketlenmesi sağlanır.
Mentype® Chimera® PCR Amplifikasyon Kiti çok hassastır. Tespit limiti 200 pg genomik DNA'dan azdır.Standart şartlar altında optimal aralık 0.2-1.0 ng DNA’dır. %5'ten daha az oranda olanhasta fraksiyonlarını tespit edilebilir, böylece reziduel hücreler veya rekürrens izlenebilir.
500 pg kontrol DNA XY5 kullanılan Mentype® Chimera® elektroferogramı. Analiz, DNA Size Standard 550 (BTO) kullanılarak ABI PRISM® 3130 Genetik Analizör üzerinde yapılmıştır. Allel tahsisi, GeneMapper® ID yazılımı ve Mentype® Chimera® şablon dosyası kullanılarak gerçekleştirilmiştir.
Allojenik kök hücre transplantasyonundan kaynaklanan moleküler kimerizmin analizi, transplant engraftmanının gidişatını kontrol etmek ve nüks tehdidi riskini değerlendirmek için optimize bir yöntem haline gelmiştir. DIP belirteçlerinin polimeraz aracılı amplifikasyonu, net analizi engelleyebilecek gölge piklerin oluşumu ilesonuçlanmaz. Ayrıca, bu polimorfizmler, alel-spesifik kantitatif yaklaşımlar için en uygun olanlardır.
Mentype® DIPscreen, donör ya da hastada bireysel olarak meydana gelen ve bilgilendirici lokusları içeren DIP polimorfizmlerini belirlemek üzere geliştirilmiş,kök hücre transplantasyonundan sonra kimerizm örneklerinin izlenmesine aracılık eden multipleks bir PCR uygulamasıdır.Kesin bir donör/hasta ayrımı ve son derece net kimerizm izleme sürecine olanak sağlar.
Tek bir multipleks-PCR'da 33 DIP-lokusu, cinsiyete özgü lokus amelogenin ile birlikte eş zamanlı olarak taranır.
Mentype® DIPscreen, yüksek düzeyde kantatatif kimerizm izlemesi için yarı nicel multipleks-PCR yaklaşımlarından yüksek hassasiyette gerçek zamanlı PCR tekniğine geçişe aracılık eder. Esnek test formatı, yalnızca minimum miktarda sarf malzemesi kullanırken herhangi bir zamanda bireysel tek numuneli tanılamaya ve yüksek ölçekli analizine olanak sağlar.
Uygun sayıda bilgilendirici lokus, ilgili veya ilişkisiz donör/alıcı çiftlerinde kimerizmin kesin araştırılmasını sağlayan tek bir amplifikasyon reaksiyonu ile tanımlanabilir. Özel bilgilendirici DIP lokusları daha sonra spesifik Mentype® DIPquant gerçek zamanlı PCR testi ile ele alınabilir.
1ng kontrol DNA XY13kullanılan Mentype® DIPscreen elektroferogramı. Analiz, DNA Size Standard 550 (BTO) kullanılarak ABI PRISM® 3130 Genetik Analizör üzerinde yapılmıştır. Allel tahsisi, GeneMapper® ID yazılımı ve Mentype® DIPscreen şablon dosyası kullanılarak gerçekleştirilmiştir.
BİZİMLE İLETİŞİME GEÇİN
